B4 09/98 HPLC
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Sujet HPLC - Septembre 1998

Temps conseillé : 50 minutes - 6 points

Les questions sont indépendantes.

1ère exercice

L'étalonnage en chromatographie d'exclusion stérique a donné les résultats suivants avec un débit de 0,8cm3.min-1.

Mp

Volume de rétention (cm3)

2.106

4,92

8.105

5

2.105

5,4

60000

5,93

20000

6,4

7000

6,88

1000

7,12

 
Quelle est la particularité d'une colonne de chromatographie d'exclusion stérique ?
Expliquez en une demi page, le principe de la chromatographie d'exclusion stérique.
Tracez la courbe d'étalonnage en fonction du temps de rétention.
Quelle est la valeur du volume poreux de la colonne ?
Quelle est la masse moyenne en nombre d'une molécule dont le temps de perméation est de 7min (l'indice de polydispersité du polymère est de 1,86) ?

N'oubliez pas de justifier toutes vos réponses.

2eme exercice

On désire déterminer la teneur en acide acrylique résiduel après la fabrication d'absorbants utilisés dans les changes de nourrissons.

 

Après extraction et concentration, le mélange est analysé. La séparation suivante a été obtenue en chromatographie liquide haute performance. Les conditions opératoires sont les suivantes:

phase stationnaire en silice greffée C18  taille de particule: 5µm
longueur de colonne: 15 cm température: 20°C 
débit: 1mL/min teneur en eau pure : 99% 

teneur en acide phosphorique (H3PO4) : 1% 
pression en tête de colonne: 55.105Pa  temps mort: 41 s

La détection est réalisée par un spectrophotomètre UV réglé à 210nm.

Le tableau des résultats est le suivant :

Nom du soluté

temps de rétention tr (min)

largeur à mi-hauteur w1/2 (min)

acide acrylique

1,83

0,1

 

  1. Quel est le mode de séparation chromatographique utilisé ?
  2. Quel est le type de polarité de phase utilisé ? Justifiez votre réponse.
  3. Si on change de colonne par une 25cm de long, quel devrait être le temps de rétention de l'acide acrylique et la pression en tête de colonne, toutes choses égales par ailleurs.
  4. Expliquez par un schéma le fonctionnement d'une vanne d'injection.

Création : 7 septembre 1998, dernière mise à jour : 2000.

ATTENTION, ce cours n'évolue plus depuis  2001,                                                                         pages "perso" de Vincent.Dalmeyda(chez)free.fr