B4 09/00 HPLC
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Sujet HPLC 14 septembre 2000

Temps conseillé : 50 minutes pour 6 points

La séparation chromatographique a été obtenue sur une colonne de silice greffée NH2 à une température de 23°C. La phase mobile (débit = 1,0 mL/min) est composée d'heptane additionné d'éthanol.

En fonction des conditions opératoires, les résultats sont présentés dans le tableau suivant :

Longueur de colonne:
15 cm

temps mort: 0,68min

teneur en éthanol: 18%

pression en tête de colonne: 33.105Pa

Nom du composé

Temps de rétention tr (min)

Largeur à mi-hauteur w1/2 (min)

A

1,90

0,082

B

5,0

0,265

C

5,50

0,281

D

6,42

0,321

Les 2 questions sont indépendantes.

1ère question
  1. Quel est le mode de polarité de phase utilisé pour cette séparation ?
  2. Calculez les résolutions R entre les couples de composés puis indiquer quels sont ceux qui ne sont pas correctement séparés.
  3. Toutes choses égales par ailleurs, quelle serait la résolution entre les composés C et D si vous utilisiez une colonne de 10 cm ?
    Pour effectuer ce calcul, vous pouvez vous baser sur la relation qui existe entre R et l'efficacité.
  4. Donnez l'allure des 2 pics C et D séparés avec la colonne de 10 cm ?

2ème question

Dans ce type de chromatographie en phase liquide, on observe que le facteur de capacité est relié à la teneur en éthanol par une relation de forme :

ln(k') = a.ln(Xs) + b

Xs étant la fraction volumique de l'éthanol

En reprenant les conditions opératoire d'origine (colonne de 15cm), mais pour une teneur de 12% en éthanol, nous avons obtenu les résultats suivants :

Longueur de colonne: 15 cm

teneur en éthanol: 12%

temps mort: 0,68min

Nom du composé

k'

Largeur à mi-hauteur w1/2 (min)

C

8,25

0,315
Calculez le temps de rétention réduit et l'efficacité de C pour une teneur en éthanol de 15% en supposant que l'efficacité est une fonction linéaire du temps de rétention réduit.

N’oubliez pas de justifier toutes vos réponses.

Rappels : Si les pics sont gaussiens (ce que l'on supposera) on a :

w0 /w1/2 = 1,70 (rapport des largeurs à la base et à mi-hauteur).

Création : 14 septembre 2000, dernière mise à jour : 2000.

ATTENTION, ce cours n'évolue plus depuis  2001,                                                                         pages "perso" de Vincent.Dalmeyda(chez)free.fr